1 液相色譜儀系統(tǒng)

　　液相色譜儀主要由貯液瓶、泵、進(jìn)樣器、柱子、柱溫箱、檢測(cè)器、數(shù)據(jù)處理系統(tǒng)組成。對(duì)于整個(gè)系統(tǒng)而言，柱子、泵和檢測(cè)器是核心部件同時(shí)也是易出問(wèn)題的主要部位。

　　2 常見(jiàn)問(wèn)題及解決方法

　　液相作為一種高精密儀器，如果在使用過(guò)程中不按照正確操作的話(huà)，就容易導(dǎo)致一些問(wèn)題。其中zui常見(jiàn)的就是柱壓?jiǎn)栴}、漂移問(wèn)題、峰型異常問(wèn)題。

　　2.1 柱壓?jiǎn)栴} 柱壓?jiǎn)栴}是使用液相色譜過(guò)程中需要密切注意的地方，柱壓的穩(wěn)定與色譜圖峰形的好壞、柱效、分離效果及保留時(shí)間等密切相關(guān)。所謂柱壓穩(wěn)定并不是指壓力值穩(wěn)定于一個(gè)恒定值而是指壓力波動(dòng)范圍在50PSI（3.3 Bar）之間（在使用梯度洗脫時(shí)，柱壓平穩(wěn)緩慢的變化是允許的）。壓力過(guò)高、過(guò)低都屬于柱壓?jiǎn)栴}。

　　2.1.1 壓力過(guò)高 這是液相在使用中zui常見(jiàn)的問(wèn)題，指的是壓力突然升高，一般都是由于流路中有堵塞的原因。此時(shí)，我們應(yīng)該分段進(jìn)行檢查。

　　(1).首先斷開(kāi)真空泵的入口處，此時(shí)PEEK管里充滿(mǎn)液體，使PEEK管低于溶劑瓶，看液體是否自由滴下，如果液體不滴或緩慢滴下，則是溶劑過(guò)濾頭堵塞。處理方法：用30%的硝酸浸泡半個(gè)小時(shí)，在用超純水沖洗干凈。如果液體自由滴下，溶劑過(guò)濾頭正常，在檢查；

　　(2).打開(kāi)Purge閥，使流動(dòng)相不經(jīng)過(guò)柱子，如果壓力沒(méi)有明顯下降，則是過(guò)濾白頭堵塞。處理方法：將過(guò)濾白頭取出，用10%的異丙醇超聲半個(gè)小時(shí)。如果壓力降至100PSI (6.7 Bar)以下，過(guò)濾白頭正常，在檢查；

　　(3).把色譜柱出口端取下，如果壓力不下降，則是柱子堵塞。處理方法：如果是緩沖鹽堵塞，則用95%的水沖至壓力正常。如果是一些強(qiáng)保留的物質(zhì)導(dǎo)致堵塞，則要用比現(xiàn)在流動(dòng)相更強(qiáng)的流動(dòng)相沖至壓力正常。假如按上面的方法長(zhǎng)時(shí)間沖洗壓力都不下降，則可考慮將柱子的進(jìn)出口反過(guò)來(lái)接在儀器上，用流動(dòng)相沖洗柱子。這時(shí)，如果柱壓仍不下降，只有換柱子入口篩板，但一旦操作不甚，很容易造成柱效下降，所以盡量少用。

　　2.1.1 壓力過(guò)低 壓力過(guò)低的現(xiàn)象一般是由于系統(tǒng)泄漏，處理方法：尋找各個(gè)接口處，特別是色譜柱兩端的接口，把泄漏的地方旋緊即可。當(dāng)然還有一個(gè)原因就是泵里進(jìn)了空氣，但此時(shí)表現(xiàn)的往往是壓力不穩(wěn)，忽高忽低，更嚴(yán)重一點(diǎn)會(huì)導(dǎo)致泵無(wú)法吸上液體。處理方法：打開(kāi)Purge閥，用3~5ml/min的流速?zèng)_洗，如果不行，則要用針筒在排空閥處借住外力將氣泡吸出。

　　2.2．漂移問(wèn)題 主要包括基線漂移和保留時(shí)間漂移。

　　2.2.1基線漂移     一般說(shuō)來(lái)，機(jī)器剛起動(dòng)時(shí)，基線容易漂移，大概要半個(gè)小時(shí)的平衡時(shí)間，如果你用了緩沖溶液或緩沖鹽，還有就是在低波長(zhǎng)下（220nm）平衡時(shí)間相對(duì)會(huì)比較長(zhǎng)，但如果你在實(shí)驗(yàn)過(guò)程中發(fā)現(xiàn)基線漂移，則你要考慮下面的原因：

　　1、柱溫波動(dòng)。解決方法：控制好柱子和流動(dòng)相的溫度，檢查是否有打開(kāi)的窗戶(hù)或空調(diào)對(duì)著柱溫箱。

　　2、流通池被污染或有氣體。 解決方法：用甲醇或其他強(qiáng)極性溶劑沖洗流通池（斷開(kāi)柱子）。如有需要，可以用1N的硝酸（不要用鹽酸）。

　　3、紫外燈能量不足。解決方法：更換新的紫外燈

　　4、流動(dòng)相污染、變質(zhì)或由低品質(zhì)溶劑配成。解決方法：檢查流動(dòng)相的組成，使用高品質(zhì)的化學(xué)試劑及HPLC級(jí)的溶劑。

　　5、樣品中有強(qiáng)保留的物質(zhì)（高K’值）以饅頭峰樣被洗脫出，從而表現(xiàn)出一個(gè)逐步升高的基線。解決方法：使用保護(hù)柱，如有必要，在進(jìn)樣之間。在分析過(guò)程中，定期用強(qiáng)溶劑沖洗柱子。

　　6、檢測(cè)器沒(méi)有設(shè)定在zui大吸收波長(zhǎng)處。解決方法：將波長(zhǎng)調(diào)整至zui大吸收波長(zhǎng)處

　　7、流動(dòng)相的PH值沒(méi)有調(diào)節(jié)好。解決方法：加適量的酸或堿調(diào)至*PH值

　　2.2.2保留時(shí)間漂移     保留時(shí)間重現(xiàn)是液相性能好壞的一個(gè)重要標(biāo)志，同一種東西，兩次的保留時(shí)間相差不要超過(guò)15s，超過(guò)了半分鐘可看做保留時(shí)間漂移，就無(wú)法進(jìn)行定性，你要考慮以下原因：

　　1、溫控不當(dāng)。解決方法：調(diào)好柱溫，檢查是否有打開(kāi)的窗戶(hù)或空調(diào)對(duì)著柱溫箱。

　　2、流動(dòng)相比例變化。解決方法：檢查四元泵的比例閥是否有故障

　　3、色譜柱沒(méi)有平衡。解決方法：在每一次運(yùn)行之前給予足夠的時(shí)間平衡色譜柱

　　4、流速變化。解決方法：重新設(shè)定流速

　　5、泵中有氣泡。解決方法：、從泵中除去氣泡

　　2.3 峰型異常問(wèn)題 峰型問(wèn)題是液相的主要問(wèn)題，在做液相過(guò)程中，我們就是要變換不同的條件來(lái)改善不好的峰型，對(duì)于各種各樣的異常峰，要區(qū)別對(duì)待，從主要問(wèn)題出發(fā)，一個(gè)一個(gè)加以解決。

　　1、色譜圖中未出峰。解決方法：系統(tǒng)未進(jìn)樣或樣品分解；泵未輸液或流動(dòng)相使用不正確；檢測(cè)器設(shè)置不正確；針對(duì)以上情況成因作相應(yīng)調(diào)整即可。

　　2、一個(gè)峰或幾個(gè)峰是負(fù)峰。解決方法：流動(dòng)相吸收本底高；進(jìn)樣過(guò)程中進(jìn)入空氣；樣品組分的吸收低于流動(dòng)相。

　　3、所有峰均為負(fù)峰。解決方法：信號(hào)電纜接反或檢測(cè)器輸出極性設(shè)置顛倒；光學(xué)裝置尚未達(dá)到平衡。

　　4、所有峰均為寬峰。解決方法：系統(tǒng)未達(dá)到平衡；溶解樣品的溶劑極性比流動(dòng)相差很多；色譜柱尺寸及類(lèi)型選擇不正確；色譜柱或保護(hù)柱被污染或柱效降低；溫度變化造成的影響。 、

　　5、所出峰比預(yù)想的小。解決方法：樣品黏度過(guò)大；進(jìn)樣品故障或進(jìn)樣體積誤差；檢測(cè)器設(shè)置不正確．定量環(huán)體積不正確；檢測(cè)池污染；檢測(cè)器燈出現(xiàn)問(wèn)題。

　　6、出現(xiàn)雙峰或肩峰。解決方法：進(jìn)樣量過(guò)大；樣品濃度過(guò)高；保護(hù)柱或色譜柱柱頭堵塞；保護(hù)拄或色譜柱污染或失效；柱塌陷或形成短通道。

　　7、前伸峰。解決方法：進(jìn)樣量或樣品濃度高；溶解樣品的溶劑較流動(dòng)相極性強(qiáng)；保護(hù)柱或色譜柱污染或失效。

　　8、拖尾峰。解決方法：柱超載，降低樣品量；增加柱直徑采用較高容量的固定相；峰干擾，對(duì)樣品進(jìn)行清潔過(guò)濾；調(diào)整流動(dòng)相；硅羥基作用，加入三乙胺，用堿致鈍化柱增加緩沖液或鹽的濃度降低流動(dòng)相pH值；柱內(nèi)燒結(jié)不銹鋼失效，更換燒結(jié)不銹鋼；加在線過(guò)濾器，對(duì)樣品進(jìn)行過(guò)濾；死體積或柱外體積過(guò)大，將連接點(diǎn)降至zui低；盡可能使用內(nèi)徑較細(xì)的連接管；柱效下降，更換柱子；采用保護(hù)柱，對(duì)柱子進(jìn)行再生。

　　9、出現(xiàn)平頭峰。解決方法：檢測(cè)器設(shè)置不正確；進(jìn)樣體積太大或樣品濃度太高。

　　10、出現(xiàn)鬼峰。解決方法：進(jìn)樣閥殘余峰，在每次進(jìn)完樣后用充足的時(shí)間來(lái)平衡和清洗系統(tǒng)；樣品中存在未知物，改進(jìn)樣品的預(yù)處理；流動(dòng)相污染，更換新流動(dòng)相，盡可能現(xiàn)配現(xiàn)用，隔夜的流動(dòng)相再次使用時(shí)要過(guò)濾；盡可能使用HPLC級(jí)試劑；流路中有小的氣泡，打開(kāi)Purge閥，加大流速排除。

　　3 結(jié)語(yǔ)

　　以上內(nèi)容只是對(duì)液相色譜中出現(xiàn)的常見(jiàn)的問(wèn)題進(jìn)行了分析，在故障排除時(shí)要遵守以下原則：一次只改變一個(gè)因素，確定假定因素與問(wèn)題之間的；如果通過(guò)更換組件來(lái)排查故障時(shí)要注意將拆下的完好組件裝回原位，避免浪費(fèi)；這是成功進(jìn)行故障排除的關(guān)鍵。總之，在使用液相色譜時(shí)一定要注意樣品的前處理與儀器的正確操作和保養(yǎng)。